1. 目的:测定被采样范围内物品的污染程度和消毒后的效果。
2. 范围:畜禽舍内墙壁、地面、笼具、料槽等设备设施,孵化场出雏器、孵化器、地面、门窗、设备、蛋托、蛋车、出雏盒、台架等。
3. 监测用品: 普通琼脂培养基、酒精灯、装有5ml灭菌蒸馏水的带塞试管、试管架、灭菌棉拭子、剪刀、记号笔、规板(自制):3.6厘米×3.6厘米(2平方英寸)、培养箱。
4. 采样时间:分别与消毒处理前和消毒处理后0.5-1小时内进行采样。
5. 采样面积:被采面积<100cm2,取全部面积;被采面积≥100cm2,取100cm2。
6. 采样区域:
6.1 墙壁选择4点(东、南、西、北各1点),距地面垂直高度80-150cm,分别位于墙壁的中央平整处,避开通风和降温措施。
6.2 地面选择4点,在人行通道中央平整处。
6.3 水槽、料槽各选择4点,位于槽的外壁中央平整处。
6.4 水线选择4点,位于整体中央平整处,沿管线滚动规板。
6.5 笼具、蛋托、蛋车、出雏盒、台架等选择4点,位于整体中央平整处。
7.采样方法
7.1 将规板用酒精灯灭菌后扣在被测物体的表面。
7.2 在装有5-10毫升灭菌生理盐水的带塞试管中浸湿灭菌棉拭子,在试管壁上挤压去多余的盐水,然后在规板范围内滚动棉棉拭子横竖各5次涂抹取样。
7.3 将采集好样品的棉拭子在酒精灯火焰旁,剪去棉拭子手持端,使棉拭子落入生理盐水试管中,塞紧试管塞,以同样方法在同一物体上的不同处采样4个,标记并记录,带回实验室检验。
8.送检时限:采样后尽快送检,将采样管放于装有干冰的保温箱内(最好使保温箱的温度达到0~4℃),2h内送往化验。
9.送检运输:轻拿轻放,采样管切勿倒置,防震防颠簸防碰撞。
10.检测方法
10.1 用灭菌的镊子夹住棉拭子,在试管内的盐水中反复提拉和敲打采样试管(用力震打80次)或在旋涡振荡器上震荡1分钟左右,充分洗下棉拭子上的细菌。
10.2 用灭菌吸管从采样管中吸取1ml菌悬液加入4ml装有灭菌蒸馏水的试管中,作10倍递增稀释,根据样品的污染程度,选择3个稀释度,每个稀释度,分别取1ml放入灭菌平皿内加入45℃左右灭菌营养琼脂培养基15ml,边倾注边摇匀,作倾注培养,每个样品做2个平行。
10.3 待普通琼脂凝固后,置37℃温箱中培养24-48小时,观察并记录平板上的平均菌落数。
10.4 根据平板上的菌落数和菌液的稀释倍数计算出取样范围内的细菌总数。
计算公式为:物体表面细菌菌落总数(cfu/cm2)=平板平均菌落数*稀释倍数*采样管液体毫升数/采样面积(cm2)
11.评价:1 cm2菌落数
优: 0-10; 良: 11-20; 中: 21-30; 差: 30以上